使用离子交换柱纯化蛋白常见问题

采用离子交换柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定，可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?

    离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值，其具体的离子浓度范围可以很大，0.01mol/l到1mol/l，甚至3.0mol/l，PH值的范围液很广。

    因为蛋白是通过静电引力可逆的结合在离子交换树脂上，要使蛋白与离子交换树脂之间离子键打开，最常用的方法就是加大反荷离子的浓度。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，其强弱关系为： 阳性竞争离子：Ag+》CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好，可用另一种亲和力强的离子代替。

    离子交换柱属于弱离子交换剂，只有在一定的pH值范围内，才能有离子交换能力。