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使用离子交换柱纯化蛋白常见问题

2017-07-29 点击数:2806
采用离子交换柱纯化蛋白时,洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定,可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?
采用离子交换柱纯化蛋白时,洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定,可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?

    离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质,即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成,根据引入解离基团的不同,可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同,亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加,而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化,需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样,通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱,纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值,其具体的离子浓度范围可以很大,0.01mol/l到1mol/l,甚至3.0mol/l,PH值的范围液很广。

    因为蛋白是通过静电引力可逆的结合在离子交换树脂上,要使蛋白与离子交换树脂之间离子键打开,最常用的方法就是加大反荷离子的浓度。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的,其强弱关系为: 阳性竞争离子:Ag+》CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子:I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好,可用另一种亲和力强的离子代替。

    离子交换柱属于弱离子交换剂,只有在一定的pH值范围内,才能有离子交换能力。
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